細胞培養(cell culture)是指在體外模擬體內環境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術,在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。不論對于整個生物工程技術,還是其中的生物克隆技術來說,細胞培養都是一個必不可少的過程,細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或少分化的多細胞,這是克隆技術必不可少的環節,而且細胞培養本身就是細胞的克隆。細胞培養技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術,通過細胞培養既可以獲得大量細胞,又可以借此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。
想要培養細胞可不是一件容易的事,一個步驟做錯,就會功虧一簣,恒遠生物技術人員就給大家著重講解一下,細胞培養如何預防污染。
1.細胞污染的預防
①實驗用品防止污染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒,各種溶液滅菌要仔細,并在無菌實驗檢測陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。
②操作過程防止污染。
③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進入細胞間。
④實驗開始需要確定戴的手套沒有問題,只要接觸過生物安全柜之外的物品,必須及時對手套進行消毒。
⑤進入細胞培養間后關好門,坐下來盡量少走動以免影響生物安全柜的風簾。工作開始要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞,不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內,更不能隨便使用,以免造成大規模污染。
⑥細胞操作時動作要輕,必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口,并將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼,注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。
⑦實驗操作時生物安全柜的隔板要盡可能放低,盡量減少談話,打噴嚏或咳嗽時絕對不能對著工作區,以免造成不必要的污染。
⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方,以避免瓶蓋被誤操作所污染。
⑨不要從敞開的容器口上方經過,以避免衣服上掉落不明物體對細胞的污染。
⑩實驗操作時要注意及時更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管,切勿一根管子做到底。一旦發現接觸了非潔凈或者無法確定潔凈的物品必須直接丟棄。實驗完畢應及時收拾,保持實驗室清潔整齊,用75%酒精清潔臺面。
2.防止細胞交叉污染
①在進行多種細胞培養操作時,所用器具要嚴格區分,作上標記便于辨別。按順序進行操作,一次只處理一種細胞,多種細胞多種操作一起進行時易發生t昆亂。
②在進行換液或傳代操作時,粘有細胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口,以免把細胞帶到培養基中污染其他細胞。
③所有細胞一旦購置,或從別處引入,或自己建立,必須及時保種凍存,一旦發生污染可重新復蘇細胞,繼續培養。
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原創作者:上海恒遠生物科技有限公司